Trimethoprim se používá ve veterinární medicíně nejčastěji v kombinaci s sulfadiazinem, sulfadoxinem nebo sulfamethoxazolem v poměru 1:5 jako antibakteriální léčivo[1] a je účinný proti širokému spektru mikroorganismů. Jeden ze způsobu jejich podávání je finální krmivo. Metody stanovení trimethoprimu v krmivech se omezují většinou na simultánní stanovení trimethoprimu i příslušného sulfonamidu. Pro detekci 25 nebo 29 veterinárních léčiv používaných jako profylaktika respektive růstové stimulátory v krmivech byla aplikována metoda HPLC.[2] Hlavní výhodou této screeningové metody je identifikace jednoho nebo více těchto aditiv během jednoho pracovního dne za použití dvou různých elučních systémů HPLC (gradientový a isokratický mód za použití mobilní fáze o složení acetonitril + voda + octanový pufr). Ke simultánnímu stanovení sulfadimidinu, sulphamethoxypyridazinu a trimethoprimu v premixech těchto látek byla vypracována HPLC metoda s UV detekcí při 254 nm[3]. K extrakci trimethoprimu použili autoři přímo mobilní fázi acetonitril + 0,05 M-H2SO4 (11+39) a po naředění mobilní fází se extrakt přímo použije k HPLC analýze v isokratickém módu. Metoda stanovení trimethoprimu a sulfadiazinu v krmivech pro ryby byla publikována v roce 1990 (cit.[4]). Sledovaná aditiva byla extrahována opakovaně methanolem a po spojení extraktů a naředění se použije přímo k HPLC analýze v isokratickém módu za použití mobilní fáze voda+acetonitril+HClO4 (300+100+0,2) s UV detekcí při 230 nm. Směrodatná odchylka stanovení byla vypočtena na 8 % relat. Jiná metoda stanovení trimethoprimu a sulfadiazinu v krmivech pro ryby používá extrakci 0,7 % trichloroctovou kyselinou na ultrazvuku při 40 °C a po naředění fosfátovým pufrem se takto získaný extrakt použije přímo k HPLC analýze v isokratickém módu za použití mobilní fáze 0,01 M - Na2HPO4 pH 3 (upravené triethylaminem) + acetonitril (79 + 21) s UV detekcí při 270 nm. Jako interní standard se používá sulfadimidin. Výtěžnost metody je 100-105 % pro trimethoprim.[5]
Další metody stanovení trimethoprimu jsou jeho metody stanovení v tělních tekutinách nebo tkáních. Vzhledem k nízkému obsahu trimethoprimu se využívá předkolonová derivatizace trimethoprimu formaldehydem a trifluoroctovou kyselinou při 100 °C po dobu 30 minut[7] nebo postkolonové derivatizace fluorescaminem.[8]
Metoda stanovení trimethoprimu v premixech doplňkových látek a finálních krmivech metodou HPLC[6].
Trimethoprim se extrahuje extrakčním roztokem methanol-voda resp. dichlormethanem pro premixy resp. krmné směsi. Extrakt se naředí (premixy) resp. se přečistí reextrakcí ředěnou kyselinou sírovou a extrakcí na pevné fázi C18 (krmné směsi). Trimethoprim se stanoví na reverzní fázi s iontovými páry a UV detekcí při 271 nm. Chromatogram. Metoda stanovení trimethoprimu je validována.
Literatura
[1] Bushby S.R.M.: J. Am. Vet. Med. Assoc. 176, 1049 (1980).
[2] Genouel C., Rues M.C., Desplanques D.: Ann. Falsif. Expert. Chim. Toxicol. 91, 175 (1998).
[3] Torel, J., Cillard, J., Cillard, P., Vie, M.: J. Chromatogr. 323, 447 (1985).
[4] McNally, V., Lenehan, T., Kelly, M. T., Smyth, M. R.: Anal. Lett. 23, 2215 (1990).
[5] Hormazabal, V., Steffenak, I., Yndestad, M.:J. Chromatogr. 648, 183 (1993).
