Stanovení trimethoprimu metodou HPLC
Validační parametry
Mez detekce a mez stanovitelnosti
Přesnost metody je definována jako těsnost shody získané hodnoty s jeho hodnotou skutečnou přijatou referenční hodnotou. Jedná se tedy o statisticky významnou rozdílnost mezi získanou a skutečnou hodnotou. Nalezené hodnoty modelového vzorku byly s očekávanými hodnotami srovnány pomocí lineární regrese. Očekávané hodnoty byly považovány za nezávisle proměnné, nalezené hodnoty jako závisle proměnné.
Tabulka I. Výsledky měření - krmné směsi
|
Statistické parametry |
|
|||
|
Očekávaná hodnota [mg/kg] |
16,3 |
25,2 |
34,8 |
45,7 |
|
Nalezená hodnota [mg/kg] |
17,1 |
24,5 |
34,5 |
44,4 |
|
Interval spolehlivosti [mg/kg] |
0,48 |
0,74 |
0,70 |
1,26 |
|
Směrodatná odchylka [mg/kg] |
0,30 |
0,46 |
0,44 |
0,79 |
|
Výtěžek metody [%] |
104,6 |
97,0 |
99,1 |
97,0 |
|
Interval spolehlivosti výtěžnosti [%] |
2,8 |
3,0 |
2,0 |
2,8 |
Průměrná hodnota výtěžnosti metody pro obsahy trimethoprimu od 16 do 45 mg/kg je 99,4 ± 5,7 %. Konstanta a regresního vztahu (konstantní soustavná odchylka) má hodnotu 1,4021 ± 3,6194 a statisticky se neliší od nuly, konstanta b regresního vztahu (proporcionální soustavná odchylka) má hodnotu 0,9403 ± 0,1117 a neliší se statisticky od jedničky.
Mez detekce a mez stanovitelnosti
Mez detekce a mez stanovitelnosti byla vypočtena z kalibračního modelu, kdy mez detekce odpovídá hodnotě koncentrace, pro kterou je dolní mez (1-a)%ního intervalu spolehlivosti predikce signálu z kalibračního modelu rovna kritické úrovni a mez stanovitelnosti je nejmenší hodnota signálu, pro kterou je relativní směrodatná odchylka predikce z kalibračního modelu dostatečně malá a obyčejně se pokládá hodnotě 0,1.
Mez detekce má hodnotu 0,35 mg/l, tj. pro danou standardní operační proceduru 1,8 mg/kg a mez stanovitelnosti má hodnotu 0,52 mg/l, tj. pro danou standardní operační proceduru 2,6 mg/kg.
Při lineární kalibraci je testována volba vhodného kalibračního modelu a výpočet odhadu jeho parametrů a výpočet směrodatné odchylky. Při výpočtu hodnot koeficientů a, b se vycházelo z platnosti modelu regresní závislosti, který předpokládá konstantní rozptyl pro všechny hodnoty závisle proměnné - použití metody nejmenších čtverců. Vypočtené hodnoty koeficientů a,b a jejich statistické parametry jsou uvedeny v tabulce II.
Tabulka II. Vypočtené hodnoty koeficientů a,b a jejich statistické parametry
|
Parametr |
Odhad |
STDa |
L1,2b |
|
a |
6 265 |
927 |
3 991 |
|
b |
24 809 |
42 |
181 |
a - směrodatná odchylka, b - L1,2 - interval spolehlivosti
Kalibrační přímka je lineární (korelační koeficient r = 0,99999) v rozsahu 4 - 40 mg/l při nástřiku 25 ml.