Stanovení olachindoxu metodou HPLC
Validační parametry
Mez detekce a mez stanovitelnosti
Přesnost metody je definována jako těsnost shody získané hodnoty s jeho hodnotou skutečnou přijatou referenční hodnotou. Jedná se tedy o statisticky významnou rozdílnost mezi získanou a skutečnou hodnotou.
Výsledky – premixy doplňkových látek
Výsledky měření jsou zahrnuty do tabulky I.
Tabulka I. Výsledky měření - hodnota výtěžnosti metody a Studentův t-test
|
n |
P1 |
P2 |
P3 |
P4 |
|
1 |
907 |
4 872 |
7 170 |
9 516 |
|
2 |
909 |
4 827 |
7 066 |
9 422 |
|
3 |
906 |
4 761 |
7 285 |
9 421 |
|
Očekávaná hodnota (mg/kg): |
913 |
4 846 |
7 355 |
9 983 |
|
Průměr (mg/kg): |
907 |
4 820 |
7 174 |
9 453 |
|
STD (mg/kg): |
1,5 |
55,8 |
110 |
54,6 |
|
ttab: |
3,18 |
3,18 |
3,18 |
3,18 |
|
tvyp: |
6,93 |
0,81 |
2,86 |
16,81 |
|
Výtěžnost (%) : |
99,3 |
99,5 |
97,5 |
94,7 |
Koncentrační hladina 1 000 mg/kg (P1):
Závěr: ttab < tvyp , statisticky významný, průměr se liší o soustavnou chybu
Koncentrační hladina 5 000 mg/kg (P2):
Závěr: ttab > tvyp , není statisticky významný, průměr se liší pouze o náhodnou chybu
Koncentrační hladina 7 500 mg/kg (P3):
Závěr: ttab > tvyp , není statisticky významný, průměr se liší pouze o náhodnou chybu
Koncentrační hladina 10 000 mg/kg (P4):
Závěr: ttab < tvyp , statisticky významný, průměr se liší o soustavnou chybu
Výsledky testu pomocí regresní rovnicí jsou zahrnuty v tabulce II.
Tabulka II. Výsledky testu regresní rovnicí
|
a |
132,7 |
|
b |
0,945 |
|
ttab: |
2,228 |
|
ta : |
1,834 |
|
tb : |
5,086 |
|
r: |
0,999 |
Závěr:
ta < ttab - rozdíl není statisticky významný, průměr se liší pouze o náhodnou chybu.
tb > ttab - rozdíl je statisticky významný, průměr se liší o proporcionální soustavnou chybu.
Výsledky – krmné směsi
Výsledky měření jsou zahrnuty do tabulky III.
Tabulka III. Výsledky měření - hodnota výtěžnosti metody a Studentův t-test
|
n |
S1 |
S2 |
S3 |
S4 |
S5 |
|
1 |
10,4 |
21,4 |
43,5 |
63,1 |
80,0 |
|
2 |
10,2 |
21,2 |
44,0 |
62,6 |
80,2 |
|
3 |
10,2 |
21,0 |
43,5 |
62,4 |
78,8 |
|
Očekávaná hodnota (mg/kg): |
10,8 |
22,5 |
44,3 |
63,0 |
80,4 |
|
Průměr (mg/kg): |
10,3 |
21,2 |
43,7 |
62,7 |
79,7 |
|
STD (mg/kg): |
0,1 |
0,2 |
0,3 |
0,4 |
0,8 |
|
ttab: |
3,18 |
3,18 |
3,18 |
3,18 |
3,18 |
|
tvyp: |
8,66 |
11,26 |
3,46 |
1,3 |
1,52 |
|
Výtěžnost (%) : |
95,4 |
94,2 |
98,6 |
99,5 |
99,1 |
Koncentrační hladina 12,5 mg/kg (S1):
Závěr: ttab < tvyp , statisticky významný, průměr se liší o soustavnou chybu
Koncentrační hladina 25 mg/kg (S2):
Závěr: ttab < tvyp , statisticky významný, průměr se liší o soustavnou chybu
Koncentrační hladina 50 mg/kg (S3):
Závěr: ttab < tvyp , statisticky významný, průměr se liší o soustavnou chybu
Koncentrační hladina 65 mg/kg (S4):
Závěr: ttab > tvyp , není statisticky významný, průměr se liší pouze o náhodnou chybu
Koncentrační hladina 100 mg/kg (S5):
Závěr: ttab > tvyp , není statisticky významný, průměr se liší pouze o náhodnou chybu
Výsledky testu pomocí regresní rovnicí jsou zahrnuty v tabulce IV.
Tabulka IV. Výsledky testu regresní rovnicí
|
a |
-1,119 |
|
b |
1,009 |
|
ttab: |
2,160 |
|
ta : |
5,169 |
|
tb : |
2,234 |
|
r: |
0,9998 |
Závěr:
ta > ttab - rozdíl je statisticky významný a je prokázána konstantní soustavná chyba
tb > ttab - rozdíl je statisticky významný, průměr se liší o proporcionální soustavnou chybu.
Shodnost metody je definována jako údaj o míře těsnosti shody mezi vzájemně nezávislými[1] výsledky zkoušek za předem specifikovaných podmínek. Shodnost závisí pouze na rozdělení náhodných chyb a nemá vztah k pravé hodnotě. Míra shodnosti se vyjadřuje (počítá) jako směrodatná odchylka výsledků zkoušek. Shodnost za podmínek opakovatelnosti se vyjadřuje jako opakovatelnost.
Opakovatelnost metody byly vypočtena na základě výsledků měření reálných vzorku krmných směsí a premixů ve dvou paralelních opakování z její směrodatné odchylky.
Směrodatná odchylka pro obsah od 10 do 80 mg/kg pro krmné směsi je rovna sx = 0,97 a opakovatelnost rmax = 2,8 mg/kg. Pro obsahy od 1 do 10 mg/kg je sx = 0,37 a opakovatelnost rmax = 1,0 mg/kg.
Tabulka V. Konečné hodnoty opakovatelnosti pro krmné směsi
|
Obsah (mg/kg) |
rmax |
|
od 1 do 10 |
4 % rel. |
|
od 10 do 80 |
2,8 abs. |
Tabulka VI. Konečné hodnoty opakovatelnosti pro premixy doplňkových látek
|
Obsah (mg/kg) |
rmax |
|
od 300 do 1 000 |
12,5 % rel. |
|
od 1 000 do 5 000 |
125 abs. |
|
od 5 000 do 20 000 |
2,5 % rel. |
Mez detekce a mez stanovitelnosti byla vypočtena z kalibračního modelu, kdy mez detekce odpovídá hodnotě koncentrace, pro kterou je dolní mez (1-a)%ního intervalu spolehlivosti predikce signálu z kalibračního modelu rovna kritické úrovni a mez stanovitelnosti je nejmenší hodnota signálu, pro kterou je relativní směrodatná odchylka predikce z kalibračního modelu dostatečně malá a obyčejně se pokládá hodnotě 0,1.
Mez detekce má hodnotu 0,40 mg/l, tj. pro danou standardní operační proceduru 1,9 mg/kg a mez stanovitelnosti má hodnotu 0,76 mg/l, tj. pro danou standardní operační proceduru 3,0 mg/kg.
Při lineární kalibraci je testována volba vhodného kalibračního modelu a výpočet odhadu jeho parametrů a výpočet směrodatné odchylky. Při výpočtu hodnot koeficientů a, b se vycházelo z platnosti modelu regresní závislosti, který předpokládá konstantní rozptyl pro všechny hodnoty závisle proměnné - použití metody nejmenších čtverců.
Vypočtené hodnoty koeficientů a,b a jejich statistické parametry jsou uvedeny v tabulce VII.
Tabulka VII. Vypočtené hodnoty koeficientů a,b a jejich statistické parametry
|
Parametr |
Odhad |
STDa |
L1,2b |
|
a |
6 253 |
2 129 |
4 910 |
|
b |
52 356 |
126 |
290 |
a - směrodatná odchylka, b - L1,2 - interval spolehlivosti
Kalibrační přímka je lineární v rozsahu 4 - 40 mg/l při nástřiku 25 ml.
[1] Nezávislé výsledky jsou výsledky získané takovým způsobem, že nejsou ovlivněny žádným předchozím výsledkem na tomtéž nebo podobném zkoušeném vzorku