STanovení nifursolu metodou HPLC
Validační parametry
Přesnost metody je definována jako těsnost shody získané hodnoty s jeho hodnotou skutečnou přijatou referenční hodnotou. Jedná se tedy o statisticky významnou rozdílnost mezi získanou a skutečnou hodnotou. Nalezené hodnoty modelového vzorku byly s očekávanými hodnotami srovnány pomocí lineární regrese. Očekávané hodnoty byly považovány za nezávisle proměnné, nalezené hodnoty jako závisle proměnné.
Výsledky – krmné směsi
Výsledky měření jsou zahrnuty do tabulky I.
Tabulka I. Výsledky měření - krmné směsi
|
Statistické parametry |
|||||
|
Očekávaná hodnota [mg/kg] |
5 128 |
10 256 |
15 384 |
20 515 |
30 768 |
|
Nalezená hodnota [mg/kg] |
5 345 |
11 075 |
16 072 |
20 785 |
31 796 |
|
Výtěžek metody [%] |
104,2 |
108,0 |
104,5 |
101,3 |
103,3 |
|
Interval spolehlivosti |
3,4 |
4,0 |
9,0 |
7,5 |
8,6 |
|
Relativní směrodatná odchylka [%] |
1,4 |
1,6 |
3,6 |
3,0 |
3,5 |
Celková výtěžnost metody pro koncentrační hladiny 5 000 až 30 000 mg.kg-1 je (104,3 ± 3,0) %.
Konstanta a regresního vztahu (konstantní soustavná odchylka) má hodnotu 280,1 ± 319,5 a statisticky se neliší od nuly, konstanta b regresního vztahu (proporcionální soustavná odchylka) má hodnotu 1,0197 ± 0,0171 a neliší se statisticky od jedničky.
Shodnost metody je definována jako údaj o míře těsnosti shody mezi vzájemně nezávislými[1] výsledky zkoušek za předem specifikovaných podmínek. Shodnost závisí pouze na rozdělení náhodných chyb a nemá vztah k pravé hodnotě. Míra shodnosti se vyjadřuje (počítá) jako směrodatná odchylka výsledků zkoušek. Shodnost za podmínek opakovatelnosti se vyjadřuje jako opakovatelnost.
Opakovatelnost metody byly vypočtena na základě výsledků měření reálných vzorku krmných směsí ve dvou paralelních opakování z její směrodatné odchylky (počet vzorků = 40).
Pro obsah od 33,0 do 74,0 mg/kg pro krmné směsi je opakovatelnost rmax = 4,6 mg/kg. Pro obsah od 2 000 do 30 000 mg/kg pro krmné směsi je opakovatelnost rmax = 6,7 % relat.
Mez detekce a mez stanovitelnosti byla vypočtena z kalibračního modelu, kdy mez detekce odpovídá hodnotě koncentrace, pro kterou je dolní mez (1-a)%ního intervalu spolehlivosti predikce signálu z kalibračního modelu rovna kritické úrovni a mez stanovitelnosti je nejmenší hodnota signálu, pro kterou je relativní směrodatná odchylka predikce z kalibračního modelu dostatečně malá a obyčejně se pokládá hodnotě 0,1.
Mez detekce má hodnotu 1,6 mg.l-1, tj. pro daný pracovní postup 8 mg.kg-1 a mez stanovitelnosti má hodnotu 1,8 mg.l-1, tj. pro daný pracovní postup 9 mg.kg-1.
Při lineární kalibraci je testována volba vhodného kalibračního modelu a výpočet odhadu jeho parametrů a výpočet směrodatné odchylky. Při výpočtu hodnot koeficientů a, b se vycházelo z platnosti modelu regresní závislosti, který předpokládá konstantní rozptyl pro všechny hodnoty závisle proměnné - použití metody nejmenších čtverců.
Vypočtené hodnoty koeficientů a,b a jejich statistické parametry jsou uvedeny v tabulce II.
Tabulka II. Vypočtené hodnoty koeficientů a,b a jejich statistické parametry
|
Parametr |
Odhad |
STDa |
|
a |
2 103,4 |
5 907,0 |
|
b |
51154,0 |
268,5 |
a - směrodatná odchylka
Kalibrační přímka je lineární v rozsahu 0,04 – 0,32 mg/l při nástřiku 10 ml.
[1] Nezávislé výsledky jsou výsledky získané takovým způsobem, že nejsou ovlivněny žádným předchozím výsledkem na tomtéž nebo podobném zkoušeném vzorku