Existuje metoda stanovení polyetherických kyselin metodou HPLC s předkolonovou derivatizací ?
Podíváme-li se na strukturu polyetherických kyselin, je možná derivatizace karbonylové, hydroxylové nebo karbonylové skupiny.
Při derivatizaci karboxylové skupiny -COOH se vždy principiálně využívají esterifikační reakce. Jako derivatizačního činidla se využívá řada látek, které poskytují citlivou detekci jak v UV oblasti nebo poskytují fluoreskující deriváty. Tento požadavek splňují látky, které v molekule obsahují aromatické jádro.
Jako činidlo byl použit při stanovení ionophorních polyetherickým monokarboxylových kyselin p- bromacetylpyren, který poskytuje pyrenacylester (fluoreskující derivát s excitačním maximem při 360 nm a emisním maximem 420 nm) podle reakce. Reakce probíhá v prostředí acetonitrilu za přítomnosti triethylaminu jako organické báze a za přítomnosti katalyzátoru (crown-ether) kryptofixu K-222.[1] Z dalších možných reakcí k esterifikaci je využívána elegantní reakce karboxylu s diazomethanem. Jako činidlo se využívá 9-anthryldiazomethan[2] (fluoreskující derivát s excitačním maximem při 365 nm a emisním maximem 418 nm) a reakce probíhá podle schématu. Tato reakce byla využita i pro stanovení semduramicinu a maduramicinu v naší laboratoři. Semduramicin a maduramicin se extrahuje 20 % octanem ethylnatým v hexanu a po přečištění na pevné fázi Silica se převede do acetonitrilu a podrobí se derivatizační reakci při 50 °C 90 minut. Derivát se opět přečistí na pevné fázi Silica. Metoda se příliš neosvědčila z důvodu nízké reprodukovatelnosti zejména derivatizační reakce. Metodu je možné stáhnout zde (84,8 kB ve formátu rtf) nebo zde (9,8 kB ve formátu zip). Chromatogram separace. Chcete-li další bližší informace o této metodě můžete napsat …
Ačkoli neobsahuje molekula karbonylovou skupinu jako takovou, v kyselém prostředí dochází k přechodu cyklického hemiketalu na otevřený hydroxyaldehyd, který obsahuje volnou karbonylovou skupinu, která může dále vstupovat do dalších reakcí. Tohoto se využívá při derivatizační reakci karbonylové skupiny s hydraziny za tvorby hydrazonů. Jako činidla se použil dansylhydrazin (fluoreskující derivát s excitačním maximem při 220 nm a emisním maximem 470 nm). Otevření cyklického hemiketalu probíhá podle uvedeného schématu a reakce byla využita při stanovení maduramicinu v krmivech.[3]
Literatura
